इस Article में हम Gram Staining methods in Hindi ( ग्राम अभिरंजन के तरीके ) के बारे में पढ़ेंगे। जिसमे हम ग्राम अभिरंजन के सिद्धांत, Gram अभिरंजन कैसे काम करता है। आदि भी पढ़ेंगे।

Gram Staining methods in Hindi

Gram Staining माइक्रोबायोलॉजी में सामान्य, महत्वपूर्ण और सबसे अधिक इस्तेमाल की जाने वाली डिफरेंशियल स्टेनिंग तकनीक है, जिसे 1884 में डेनिश बैक्टीरियोलॉजिस्ट हंस क्रिश्चियन ग्राम द्वारा पेश किया गया था। यह परीक्षण बैक्टीरिया को ग्राम पॉजिटिव और ग्राम नेगेटिव बैक्टीरिया में अंतर करता है, जो कि वर्गीकरण और भेदभाव में मदद करता है। सूक्ष्मजीव।

ग्राम अभिरंजन के सिद्धांत

जब बैक्टीरिया प्राथमिक दाग क्रिस्टल वायलेट के साथ दागे जाते हैं और मोर्डेंट द्वारा तय किए जाते हैं, तो कुछ बैक्टीरिया प्राथमिक दाग को बनाए रखने में सक्षम होते हैं और कुछ अल्कोहल से खराब हो जाते हैं। ग्राम पॉजिटिव बैक्टीरिया की कोशिका भित्ति में पेप्टिडोग्लाइकन नामक प्रोटीन-शर्करा परिसरों की एक मोटी परत ग्राम स्टेनिंग होती है और लिपिड की मात्रा कम होती है।

सेल को रंगहीन करने से यह मोटी सेल वॉल डिहाइड्रेट और सिकुड़ जाती है, जो सेल वॉल में पोर्स को बंद कर देती है और दाग को सेल से बाहर निकलने से रोकती है। इसलिए इथेनॉल क्रिस्टल वायलेट-आयोडीन कॉम्प्लेक्स को नहीं हटा सकता है जो ग्राम पॉजिटिव बैक्टीरिया के पेप्टिडोग्लाइकन की मोटी परत से बंधा होता है और नीले या बैंगनी रंग का दिखाई देता है।

ग्राम अभिरंजन कैसे काम करता है ?

ग्राम नेगेटिव बैक्टीरिया के मामले में, कोशिका भित्ति भी सीवी-आयोडीन कॉम्प्लेक्स लेती है लेकिन पेप्टिडोग्लाइकन की पतली परत और लिपिड से बनी मोटी बाहरी परत के कारण, सीवी-आयोडीन कॉम्प्लेक्स धुल जाता है।

जब वे अल्कोहल के संपर्क में आते हैं, तो डीकोलाइज़र कोशिका की दीवारों में लिपिड को घोल देता है, जो क्रिस्टल वायलेट-आयोडीन कॉम्प्लेक्स को कोशिकाओं से बाहर निकलने की अनुमति देता है। फिर जब फिर से सफारीन से दाग लग जाता है, तो वे दाग ले लेते हैं और लाल रंग का दिखाई देते हैं।

प्रक्रिया कुछ जीवाणुओं की कोशिका भित्ति में पेप्टिडोग्लाइकन के बीच प्रतिक्रिया पर आधारित है। ग्राम के दाग में बैक्टीरिया को धुंधला करना, रंग को एक चुभने वाले के साथ ठीक करना, कोशिकाओं को रंगना और एक काउंटरस्टैन लगाना शामिल है।

प्राथमिक दाग (क्रिस्टल वायलेट) पेप्टिडोग्लाइकन से बांधता है, कोशिकाओं को बैंगनी रंग देता है। ग्राम-पॉजिटिव और ग्राम-नेगेटिव दोनों कोशिकाओं की कोशिका भित्ति में पेप्टिडोग्लाइकन होता है, इसलिए शुरू में, सभी बैक्टीरिया बैंगनी रंग के होते हैं।

ग्राम आयोडीन (आयोडीन और पोटेशियम आयोडाइड) को चुभने वाले या लगाने वाले के रूप में लगाया जाता है। ग्राम-पॉजिटिव कोशिकाएं एक क्रिस्टल वायलेट-आयोडीन कॉम्प्लेक्स बनाती हैं।

अल्कोहल या एसीटोन का उपयोग

अल्कोहल या एसीटोन का उपयोग कोशिकाओं को रंगहीन करने के लिए किया जाता है। ग्राम-नकारात्मक जीवाणुओं की कोशिका भित्ति में बहुत कम पेप्टिडोग्लाइकन होता है, इसलिए यह कदम अनिवार्य रूप से उन्हें रंगहीन बना देता है, जबकि ग्राम-पॉजिटिव कोशिकाओं से केवल कुछ रंग हटा दिए जाते हैं, जिनमें अधिक पेप्टिडोग्लाइकन (कोशिका की दीवार का 60-90%) होता है। ग्राम-पॉजिटिव कोशिकाओं की मोटी कोशिका भित्ति रंगहीन होने के कारण निर्जलित हो जाती है,

जिससे वे सिकुड़ जाती हैं और दाग-आयोडीन परिसर के अंदर फंस जाती हैं। रंग बदलने के चरण के बाद, बैक्टीरिया को गुलाबी रंग देने के लिए एक काउंटरस्टैन (आमतौर पर सफारी, लेकिन कभी-कभी फुकसिन) लगाया जाता है। दोनों ग्राम-पॉजिटिव और ग्राम-नेगेटिव बैक्टीरिया गुलाबी दाग ​​​​को पकड़ लेते हैं, लेकिन यह ग्राम-पॉजिटिव बैक्टीरिया के गहरे बैंगनी रंग के ऊपर दिखाई नहीं देता है। यदि धुंधला करने की प्रक्रिया सही ढंग से की जाती है, तो ग्राम-पॉजिटिव बैक्टीरिया बैंगनी होंगे, जबकि ग्राम-नकारात्मक बैक्टीरिया गुलाबी होंगे।

इसको करने का कारण

ग्राम स्टाइन के परिणाम प्रकाश माइक्रोस्कोपी का उपयोग करके देखे जाते हैं। क्योंकि बैक्टीरिया रंगीन होते हैं, न केवल उनके ग्राम दाग समूह की पहचान की जाती है, बल्कि उनके आकार, आकार और क्लंपिंग पैटर्न को देखा जा सकता है। यह ग्राम स्टेन को मेडिकल क्लिनिक या लैब के लिए एक मूल्यवान निदान उपकरण बनाता है। हालांकि दाग निश्चित रूप से बैक्टीरिया की पहचान नहीं कर सकते हैं, अक्सर यह जानना कि वे ग्राम-पॉजिटिव हैं या ग्राम-नेगेटिव, एक प्रभावी एंटीबायोटिक निर्धारित करने के लिए पर्याप्त है।

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